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免疫组化问题,上海远慕一一为您解答

2019-07-05 16:50 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
导读:免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体显色剂荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

  时间没有等我,是你忘了带我走 ,我左手过目不忘的的萤火,右手里是十年一个漫长的打坐。转眼间暑假已经开始了, 免疫组化问题,上海远慕一一为您解答

1、染色过强

原因及相关解决方法

a 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间:室温1小时或4度过夜

b 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28度

c DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟,以显微镜下观察为准 

 

2、非特异性背景染色

原因及相关解决方法

a 操作过程中冲洗不充分: 每步冲洗3次每次5分钟

b 组织中含过氧化物酶未阻断 :可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长

c 组织中含内原性生物素:正常非免疫动物血清再封闭

d 血清蛋白封闭不充分:延长血清蛋白封闭时间

 

3、染色弱

原因及相关解决方法 

a 抗体浓度过低、孵育时间过短:提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟

b 试剂超过有效使用时间: 应更换试剂

c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 :每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液

使试剂稀释 (应防止切片干燥)

d 室温太低 :低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜

e 蛋白封闭过度:封闭不要超过12分钟

 

4、染色阴性

原因及相关解决方法 

a 操作步骤错误:应重试设阳性对照

b 组织中无抗原:设阳性对照以验证试验结果

贵州快3c 一抗与二抗种属连接错误:仔细确定一抗二抗种属无误

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